8 (383) 2 999 245
Компания Биосилика - наборы для выделения ДНК и РНК

Набор для выделения плазмидной ДНК

Наборы серии PLD на основе спин-микроколонок предназначены для выделения плазмидной ДНК из 3-5 мл бактериальной культуры. Принцип работы – специфическое связывание ДНК с сорбентом в присутствии хаотропных солей. Позволяет выделять до 25 мкг плазмидной ДНК, пригодной для всех стандартных молекулярно-биологических процедур, спектральные характеристики препаратов A260/280=1,8-2,0. Длительность процедуры – 15 минут. Условия хранения – при комнатной температуре (раствор РНКазы А при -200С). Срок годности – 12 месяцев.

Кат. № Объем Инструкция Цена Количество
PLD-50 50 выделений 1 950 о В корзину
Товар добавлен в корзину
PLD-100 100 выделений 2 886 о В корзину
Товар добавлен в корзину

Наборы серии PLD на основе спин-микроколонок предназначены для выделения плазмидной ДНК из 3-5 мл бактериальной культуры. Принцип работы – специфическое связывание ДНК с сорбентом в присутствии хаотропных солей. Позволяет выделять до 25 мкг плазмидной ДНК, пригодной для всех стандартных молекулярно-биологических процедур, спектральные характеристики препаратов A260/280=1,8-2,0. Длительность процедуры – 15 минут. Условия хранения – при комнатной температуре (раствор РНКазы А при -200С). Срок годности – 12 месяцев.

Наборы позволяют осуществлять выделение плазмидной ДНК:

  • Эффективно – высокий выход, до 25 мкг плазмидной ДНК/выделение
  • Качественно – A260/280=1,8-2,0, выделенная ДНК пригодна для любых молекулярно-биологических реакций
  • Быстро – процедура занимает 15 минут
  • Технологично и просто – требуется только стандартное лабораторное оборудование (настольная центрифуга и микропипетки), отсутствуют длительные и утомительные стадии фенол/хлороформной экстракции и переосаждения

Применение

Плазмидная ДНК, выделенная наборами PLD, может быть использована в стандартных молекулярно-биологических процедурах, таких как:

  • Гидролиз эндонуклеазами рестрикции
  • ПЦР
  • Секвенирование (более 750 п.н.)
  • Трансформация

Принцип действия

На первом шаге выделения проводится сбор центрифугированием и лизис бактериальных клеток. Очистка ДНК на микроколонках Биосилика начинается с избирательного связывания ДНК с сорбентом в присутствии хаотропной соли, последующей отмывки связанной ДНК от примесей, и заканчивается элюцией чистого препарата ДНК.

Сорбент, изготовленный по запатентованной технологии, позволяет выделять до 25 мкг свободной от примесей ДНК. Растворы, входящие в состав наборов, обеспечивают высокий выход и чистоту конечного препарата ДНК.

Отмывка ДНК, связанной с колонкой, происходит в присутствии 80% этанола.

Эффективность сорбции ДНК зависит от значения pH. Связывание ДНК с сорбентом происходит при pH < 7,5, а элюция ДНК — при pH > 7,5. Элюция ДНК проводится буфером, содержащим 10 мМ Трис, рН = 8,5. Оптимальный объем элюции — 50 мкл. Элюция меньшим объемом (не рекомендуется элюировать менее чем 30 мкл) повышает концентрацию ДНК в конечном препарате, вместе с тем увеличиваются потери (выход 60 — 70%).

Срок годности и условия хранения

  • Срок годности – 12 месяцев
  • Раствор РНКазы хранить при – 200С
  • Буфер R после добавления РНКазы хранить при +40С
  • Остальные компоненты набора хранить при комнатной температуре

Контроль качества

Наборы тестируются путем выделения плазмиды pBluescript II в соответсвии с протоколом. Качество полученных препаратов ДНК оценивается при помощи спектрофотометрии, гель-электрофореза и гидролиза рестриктазами.

PLD-50 PLD-100
Микроколонки 50 шт 100 шт
2 мл пробирки 50 шт 100 шт
Буфер R 12 мл 22 мл
Буфер L 12 мл 22 мл
Буфер N 12 мл 22мл
Буфер W 8 мл 15 мл
Буфер E 5 мл 10 мл
РНКаза A 120 мкл 220 мкл
Инструкция 1 шт 1 шт
Инструкция «PLD-50, Биосилика»
Инструкция «PLD-100, Биосилика»
Проблема – мало ДНК на выходе
Возможная причина

Слишком много бактерий, не полный лизис

Решение

Осаждать клетки из меньшего объема. Рекомендуется начать с 3 мл культуры

Возможная причина

Осадок клеток не полностью ресуспендирован, не полный лизис

Решение

Ресуспендировать осадок более тщательно до полного разрушения бактериальных сгустков.

Возможная причина

Не полная нейтрализация после лизиса

Решение

Тщательно перемешивать после добавления Буфера N

Возможная причина

Перед стадией элюции не полностью удалены остатки Буфера W

Решение

Обратите внимание на пункт о дополнительном центрифугировании

Проблема — загрязнение геномной ДНК
Возможная причина

Слишком активное встряхивание после добавления Буфера N

Решение

Перемешивайте более аккуратно, встряхиванием пробирки

Фирменные растворы для выделения ДНК и РНК

 Кат. номер Название, объем Цена
BR-50 Буфер R, 50 мл 500 о
BL-50 Буфер L, 50 мл 700 о
BN-50 Буфер N, 50 мл 2 000 о
BW-15 Буфер W, 15 мл (концентрат) 500 о
BE-20 Буфер E, 20 мл 400 о

Все растворы